液相色譜－質(zhì)譜法檢測地表水、工業(yè)廢水等水質(zhì)中丁基黃原酸的原理，是將水樣中丁基黃原酸經(jīng)液相色譜儀分離后，用串聯(lián)質(zhì)譜儀在多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）條件下測定，根據(jù)保留時間和特征離子定性，內(nèi)標(biāo)法定量。丁基黃原酸作為一種常見的有機污染物，主要來源于選礦、冶金等工業(yè)廢水排放，對水生生態(tài)系統(tǒng)具有潛在危害。

檢測試劑

1、乙腈，色譜級。

2、氨水。

3、丁基黃原酸鉀：純度≥95%。

4、氫氧化鈉。

5、鹽酸：1.19g/ml。

6、氨水溶液：（pH≈9.5）

取一定量氨水溶于水中，調(diào)節(jié)pH≈9.5，現(xiàn)用現(xiàn)配。

7、氫氧化鈉溶液：0.4g/ml。

稱取4g氫氧化鈉溶于水中，稀釋至10ml。

8、氫氧化鈉溶液：4mg/ml。

取1.0ml氫氧化鈉溶液，稀釋至100ml。

9、鹽酸溶液：1+99（V/V）。

取1.0ml鹽酸稀釋至100ml。

標(biāo)準(zhǔn)溶液

10.1 丁基黃原酸標(biāo)準(zhǔn)貯備液：100mg/L。

稱取0.0330g丁基黃原酸鉀標(biāo)準(zhǔn)品，置于250ml棕色容量瓶內(nèi)，加少量水溶解，再加3滴氫氧化鈉溶液，使pH為9-10，用水定容250ml。貯備液在4℃冷藏避光保存，可穩(wěn)定保存20d。丁基黃原酸標(biāo)準(zhǔn)貯備液也可直接購買市售有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

10.2 丁基黃原酸標(biāo)準(zhǔn)使用液：1.00mg/L。

吸取1.00ml丁基黃原酸標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液，置于100ml棕色容量瓶內(nèi)，用氨水溶液定容。此溶液現(xiàn)用現(xiàn)配。

10.3 內(nèi)標(biāo)（2,4-二氯苯氧乙酸13C6）貯備液：100ug/ml。

直接購買有證標(biāo)準(zhǔn)溶液。內(nèi)標(biāo)貯備液于4℃冷藏避光保存或參照制造商的產(chǎn)品說明保存。

10.4 內(nèi)標(biāo)使用液：1.0ug/ml。

將內(nèi)標(biāo)貯備液用乙腈稀釋至1.0ug/ml，內(nèi)標(biāo)使用液于4℃冷藏避光保存或參照制造商的產(chǎn)品說明保存。

11、氮氣：純度≥99.9%。

12、氬氣：純度≥99.999%。

樣品采集與保存技術(shù)

1、采樣器具準(zhǔn)備：應(yīng)使用棕色玻璃瓶或聚四氟乙烯材質(zhì)的容器，避免使用塑料制品以防吸附。采樣前需用稀酸和有機溶劑依次清洗，最后用超純水沖洗干凈。

2、現(xiàn)場采樣：采樣時應(yīng)避免劇烈攪動水體，采集表層以下30cm處水樣。若檢測項目包括揮發(fā)性組分，應(yīng)完全注滿樣品瓶，減少頂空。

3、樣品保存：采集后的樣品應(yīng)立即加入鹽酸調(diào)節(jié)pH至2-3，置于4℃避光保存。根據(jù)《水質(zhì)采樣技術(shù)指導(dǎo)》（HJ 494-2009），酸化處理后的樣品保存期不宜超過7天，最好在48小時內(nèi)完成分析。

檢測所用設(shè)備

1、液相色譜/質(zhì)譜儀:配有電噴霧離子化源，三重四極桿質(zhì)譜或具有同等功能質(zhì)譜。

2、色譜柱:C18柱或其他等效色譜柱，參考規(guī)格為50 mm×2.1 mm，1.7um（色譜柱需耐受pH不小于10流動相）。

3、分析天平:感量為0.0001 g。

4、濾膜:孔徑0.22um，親水性聚丙烯、玻璃纖維、親水性PTFE或其它等效材質(zhì)。

5、棕色樣品瓶:2.0 ml。

6、微量注射器:10ul、50ul、100ul、1 ml。

7、一般實驗室常用儀器和設(shè)備。

水樣保存注意事項

水樣采集在40ml棕色玻璃容器中，采樣瓶應(yīng)完全注滿不留氣泡，采樣后用氫氧化鈉溶液或鹽酸溶液將樣品pH調(diào)至9-10，水樣4℃冷藏避光保存，48h內(nèi)完成分析。

制備水樣

水樣恢復(fù)至室溫，測定其pH，確保pH為9-10，否則用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)，經(jīng)濾膜過濾后，取水樣1.0ml，置于棕色樣品瓶中，加入內(nèi)標(biāo)使用液10.0ul，混勻待測。

空白試樣的制備

1、實驗室空白

以實驗用水代替水樣，按照與試樣制備相同的步驟進(jìn)行實驗室空白試樣的制備。

2、全程序空白

采樣前按照樣品采集與保存方法，用實驗用水配制全程序空白樣品，并將其隨采樣過程帶至采樣現(xiàn)場，全程序空白樣品與實際樣品同時到達(dá)實驗室，按照與試樣制備相同的步驟進(jìn)行全程序空白試樣的制備。

前處理方法

1、固相萃取法（SPE）：

采用C18或HLB固相萃取柱進(jìn)行富集。具體步驟包括：活化（5mL甲醇、5mL超純水）、上樣（500mL水樣以5mL/min流速通過）、淋洗（5mL5%甲醇水溶液）、洗脫（5mL甲醇）。洗脫液經(jīng)氮吹濃縮至近干，用1mL初始流動相復(fù)溶。

2、液液萃取法：

取250mL水樣，加入10mL二氯甲烷，振蕩萃取10分鐘，靜置分層后收集有機相。重復(fù)萃取兩次，合并有機相經(jīng)無水硫酸鈉脫水后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至1mL。

3、衍生化處理：

對于氣相色譜法檢測，需進(jìn)行衍生化反應(yīng)。將萃取物與BSTFA（N,O-雙(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺）在60℃反應(yīng)30分鐘，生成穩(wěn)定的硅烷化衍生物。

檢測步驟

儀器參考條件－液相色譜儀參考條件

流動相：流動相A為乙腈，流動相B為氨水溶液，梯度洗脫程序參照液相色譜流動相關(guān)圖表。

柱溫：40℃

進(jìn)樣體積：10ul

流速：0.2ml/min

質(zhì)譜儀參考條件

負(fù)離子模式（ESI-），離子化電壓：3000V，離子源加熱氣體溫度：120℃，檢測方式

為多反應(yīng)監(jiān)測（MRM），具體條件參照目標(biāo)化合物的多反應(yīng)檢測條件。

儀器調(diào)諧

對液相色譜/質(zhì)譜儀進(jìn)行儀器質(zhì)量數(shù)和分辨率校正，其中儀器質(zhì)量數(shù)偏移在±0.5Da之內(nèi)，質(zhì)譜峰半峰寬在0.6Da-0.9Da之間。

建立校準(zhǔn)曲線

取一定量丁基黃原酸標(biāo)準(zhǔn)使用液于氨水溶液中，制備5個濃度點的標(biāo)準(zhǔn)系列，丁基黃原酸的質(zhì)量濃度分別為1.0ug/L、5.0ug/L、10.0ug/L、50.0ug/L和100ug/L，每毫升標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中加入10.0ul內(nèi)標(biāo)使用液，使內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量濃度為10.0ug/L，貯存在棕色樣品瓶中。

將標(biāo)準(zhǔn)系列溶液按濃度由低到高的順序依次進(jìn)樣，以丁基黃原酸的峰面積（或峰高）與內(nèi)標(biāo)物的峰面積（或峰高）比值和內(nèi)標(biāo)物濃度的乘積為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中丁基黃原酸的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制校準(zhǔn)曲線，回歸方程見公式y(tǒng)=a+bx。

水樣測定

按照與建立校準(zhǔn)曲線的相同步驟對水樣進(jìn)行檢測?？瞻自囼灆z測同樣依照此方法進(jìn)行。

丁基黃原酸的定性分析

按照目標(biāo)化合物的多反應(yīng)監(jiān)測條件表中確定的丁基黃原酸的母離子和子離子進(jìn)行檢測，在相同實驗條件下，試樣中丁基黃原酸的保留時間與標(biāo)準(zhǔn)樣品中丁基黃原酸的保留時間相對偏差的絕對值應(yīng)小于2.5%；且待測樣品中定性離子的相對豐度（Ksam見公式2）與濃度接近的標(biāo)準(zhǔn)溶液中對應(yīng)的定性離子相對豐度（Kstd見公式3）進(jìn)行比較，所得偏差在定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差圖中規(guī)定的最大允許偏差范圍內(nèi)，則可判定為樣品中存在丁基黃原酸。

丁基黃原酸的定量分析

丁基黃原酸經(jīng)定性鑒別后，根據(jù)定量離子的峰面積（或峰高），用內(nèi)標(biāo)法計算。水樣中丁基黃原酸的質(zhì)量濃度按公式p=p1xf計算。

技術(shù)難點與解決方案

1、穩(wěn)定性問題：丁基黃原酸易分解，現(xiàn)場采樣后應(yīng)立即酸化處理，運輸過程保持低溫。

2、基質(zhì)干擾：工業(yè)廢水成分復(fù)雜，可通過優(yōu)化固相萃取洗脫程序或采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線消除。

3、假陽性結(jié)果：建議陽性樣品采用兩種不同原理的方法確認(rèn)，如HPLC與GC-MS聯(lián)用。

4、痕量分析挑戰(zhàn)：對于超低濃度樣品，可采用大體積富集（1-2L水樣）結(jié)合高靈敏度檢測器（如HPLC-MS/MS）。

地表水中丁基黃原酸的準(zhǔn)確檢測對環(huán)境保護(hù)具有重要意義。在實際工作中，應(yīng)根據(jù)監(jiān)測目的、設(shè)備條件和數(shù)據(jù)質(zhì)量要求選擇適宜的方法，并嚴(yán)格執(zhí)行質(zhì)量控制措施。隨著分析技術(shù)的進(jìn)步，更快速、更靈敏、更可靠的檢測方法將不斷涌現(xiàn)，為水環(huán)境管理提供有力技術(shù)支撐。監(jiān)測人員應(yīng)持續(xù)關(guān)注方法更新，定期參加技術(shù)培訓(xùn)，確保檢測數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可比性。

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